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Methyltransferasen; Basenausklapp-Mechanismus; Dam DNA-MTase aus E. col; 2-Aminopurin; Photocrosslinking; Fluoreszenztitrationen; Analytische Ultrazentrifugation; Transientenkinetik; Kristallisation
Abstract:
Neben den in DNA natürlich vorkommenden Nukleobasen Adenin, Cytosin, Guanin und Thymin findet man auch die methylierten Basen N6-Methyladenin, N4-Methylcytosin und C5-Methylcytosin. Durch diese Methylierung wird der Informationsgehalt der DNA erhöht und dient verschiedenen Systemen innerhalb der Zelle als Signal. Die Modifikation wird durch DNA-Methyltransferasen (DNA-MTasen) katalysiert. In dieser Arbeit wird die Bindung der Dam DNA-MTase aus Escherichia coli, welche zu der Gruppe der N6-Adenin DNA-MTasen gehört, an DNA charakterisiert. Dieses Enzym bindet dabei als Dimer an die DNA und überträgt die Methylgruppe mittels eines Basenausklapp-Mechanismus. Weiterhin konnte die Dam DNA-MTase kristallisiert werden und der Tyrosinrest des hochkonservierten DPPY-Motivs als an der DNA-Bindung beteiligte Aminosäure identifiziert werden.
